rna聚合酶是以一条DNA链或RNA为模板，三磷酸核糖核苷为底物、通过磷酸二酯键而聚合的合成RNA的酶，因为在细胞内与基因DNA的遗传信息转录为RNA有关，所以也称转录酶。rna聚合酶作用于磷酸二酯键。
rna聚合酶需要四种核糖核苷酸三磷酸(NTP：ATP、GTP、CTP、UTP)作为RNA聚合酶的底物，DNA为模板，二价金属离子Mg2+、Mn2+是该酶的必需辅因子。其催化的反应表示为：(NMP)n+NTP→(NMP)n+1+PPi。RNA链的合成方向也是5’→3'，第一个核苷酸带有3个磷酸基。其后每加入一个核苷酸脱去一个焦磷酸，形成磷酸二酯键，焦磷酸迅速水解的能量驱动聚合反应。与DNA聚合酶不同，RNA聚合酶无须引物，它能直接在模板上合成RNA链;RNA聚合酶能够局部解开DNA的两条链，所以转录时无须将DNA双链完全解开，RNA聚合酶无校对功能。
RNA聚合酶催化RNA的合成，其与DNA聚合酶有许多相同的催化特点：①以DNA为模板;②催化核苷酸通过聚合反应合成核酸;③聚合反应是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯键的反应;④以3’→5’方向阅读模板，5’→3’方向合成核酸;⑤按照碱基配对原则忠实转录模板序列。